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骨髓细胞染色体标本的制备方法

日期:2008-7-4 11:35:55    点击:次 来源:北京东方博大医院
 

一、原理
骨髓染色体标本制备通常用于白血病患者,特别是慢性或急性粒细胞性白血病,因为骨髓反映粒系统细胞增生情况,这些病人不宜用外周血。即
使是淋巴细胞性白血病,也不主张用外周血,因为加PHA刺激外周血培养,只能获得正常淋巴细胞分裂相,并不能反映那些病理淋巴细胞的染色体
改变。
骨髓细胞属不断增殖的细胞,培养可分短期培养和直接制片法,无论哪种其培养液中均不需加PHA。
二、用品和试剂
同外周血染色体制备。
三、操作步骤
(一)短期培养法
1.取材、培养:从髂骨取骨髓液0.2—0.5ml,无菌注入装有5ml培养液的培养瓶中,37℃培养23—25小时后,加入秋水仙碱(终浓度为0.07μg/
ml),继续培养3—4小时,收获。
2.染色体制片:低渗、固定、制片及染色同实验一。
(二)直接制备法
1.从髂骨抽取0.3—0.5ml,立即注入浓度为0.07μg/ml的秋水仙碱的生理盐水5ml中,以吸管轻轻吸动,将骨髓中脂肪颗粒充分吸掉,1000rpm
离心8分钟,弃上清。
2.加入同样浓度的秋水仙碱生理盐水2—3ml,室温放置2—3小时,离心弃上清。
3.染色体制片:低渗、固定、制片及染色同外周血染色体制备。

 

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