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细胞培养的基本原理

日期:2008-7-4 11:38:30    点击:次 来源:北京东方博大医院
 

细胞培养是用酶消化法将组织碎块分离成单个细胞,用培养基制成细胞悬液,在体外适宜条件下,使细胞生长繁殖,并保留其一定的结构和功能特性。细胞培养与组织培养、器官培养主要不同点在于原始培养的对象不同。细胞培养使用的是单个细胞悬液,组织培养使用的是组织块(0.5~1立方毫米)或薄片(厚0.2毫米),而器官培养使用的是器官原基或器官的一部分或整个器官。在组织培养中,细胞自组织块周围移出并生长,细胞在生长过程中总有移动(运动)或其它变动,这样就使被培养的组织难以长期维持其原有的结构和功能。培养时间越长,发生变化的可能性越大,结果常使单一类型的细胞保存下来,最终成了细胞培养。在细胞培养中,细胞生命活动和体内细胞一样,仍然是相互依存的,呈现一定的组织特异性,所以组织培养和细胞培养实际上无严格区别。
 
细胞培养技术是生命科学中常用的研究手段,该方法能排除神经体液因素的影响及肝、肾解毒功能的干扰,观察某些因素或药物对培养细胞的直接作用。通过实验可获得某一类型细胞的纯培养。如心肌组织中心肌细胞约占50%,非心肌细胞占50%;而经纯化分离的心肌细胞悬液中,心肌细胞可达95%以上,这样,心肌细胞原代培养实验基本不受其它细胞的干扰。在细胞培养实验中能直接观察到培养细胞生命活动的动态过程;用定时显微摄影记录可发现一些肉眼观察不到的生命现象;还可利用电镜手段、同位素标记、放免法和免疫组化法等来研究细胞形态结构及细胞内化学物质的分布。此外,还能节约研究费用。如在某些研究中,用100只动物做实验所获得结论与用100张盖玻片或几十个培养瓶而获得结论具有相同的统计学意义,而细胞培养较之大批量的动物饲养花费要小。
 
但细胞培养方法也存在不足之处:培养细胞失去体内细胞的制约和整体的调节作用,细胞形态和功能会发生一定程度的改变。培养方法、实验试剂对细胞形态和功能有一定的影响,如胰蛋白酶可破坏细胞表面受体、酶、抗原等。长期体外培养的细胞,由于反复传代、冻存和操作等因素的影响,可能发生染色体非整倍体改变,呈永生化或癌变的特征。

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